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通过优化信号肽构建耐热脂肪酶大肠杆菌高效表达重组系统|188体育平台

发布时间:2021-03-17 01:56:02来源:188体育平台_官方合作网站编辑:188体育平台_官方合作网站阅读: 当前位置:首页 > 历史真相 > 手机阅读

【188体育】01文章背景概述BACKGROUNDINTRODUCTION微生物来源的耐高温脂肪酶经常在大肠杆菌中大量过传达,但是,这些酶一般来说以较低酶活性不存在,并且主要以涵括体的形式不存在。一些研究认为,将其N末端与信号肽融合、使重组蛋白展开黏液传达,可有效地解决问题这个问题。一般来说,这种方法的可行性在相当大程度上各不相同信号肽的黏液途径和要黏液的目标蛋白的类型。中国农业科学院WeiqingZhang等人在2018年在《MicrobialCellFactoriesMicrobialCellFactories》(IF=4.402,工程技术二区)上公开发表了为题“DevelopmentaneffectivesystemtoexpressionrecombinantproteininE.coliviacomparisonandoptimizationofsignalpeptides:ExpressionofPseudomonasfluorescensBJ-10thermostablelipaseascasestudy”的文章。

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该研究对荧光假单胞菌BJ-10高效黏液耐高温脂肪酶lipBJ10的信号肽展开了较为和优化。同时,将该方法与细胞质黏液法在黏液可溶性和活性脂肪酶方面展开了较为研究。本文报导的结果可为其他脂肪酶的高水平传达获取参照。

02所用到的主要方法METHODS1.双星胆碱酸法蛋白定量(BCA)2.动态定量分析3.形态计量分析03文章主要内容摘要ABSTRACT脂肪酶(三酰甘油酯水解酶,E.C.3.1.1.3)可以催化剂长链三酰甘油的水解,在水介质中获释长链脂肪酸和甘油。因绝大多数脂肪酶热稳定性劣,野生型菌株产生的脂肪酶产量较低,故而嗜冷和耐高温微生物脂肪酶目前需求量相当大。

本文依据前期取得的脂肪酶展开实验,但该脂肪酶的可溶性较好,所以建构了6株装载有所不同融合传达质粒的菌株,通过较为这6株菌株的性能,确认了最佳的信号序列,检验出有了拟合的蛋白信号肽(DsbA)以强化其可溶性蛋白传达。研究指出用于6个信号肽,即PelB和5个天然大肠杆菌信号肽作为融合伴侣展开融合传达,可以比非融合传达产生更好的可溶性和功能性重组lipBJ10。重组lipBJ10与这六种有所不同的信号肽融合后,可在大肠杆菌中黏液到细胞周质中。

所有融合传达的总脂肪酶活性皆低于非融合传达。当lipBJ10与DsbA融合时,比较活性超过峰值,产生的蛋白活性所谓融合蛋白的73.3倍。

当用于DsbA作为融合伙伴时,活性最低(265.41U/ml),涵括体的构成最多;其它4个大肠杆菌信号肽在一定程度上不会造成活性较低且不水溶液涵括体。因此,DsbA是与lipBJ10融合的最佳信号肽伴侣,可以有效地生产可溶性和功能性蛋白。与未展开融合的蛋白lipBJ10比起,融合有这些信号肽,尤其是DsbA的信号肽,可以明显增加涵括体的构成,强化lipBJ10的功能和溶解性。

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